有人用過MEF做過adipocyte differentiation嗎
我現在用的是E1A-transformed MEF cell 所以有immortality 特性
當細胞長滿的那一天(day 0)我開始加induction medium 2 天
induction medium:1% P/S
10% FBS
0.5mM IBMX
1uM Dex
10ug/ml insulin
10uM troglitazone
DMEM
兩天後換成含10ug/ml insulin. 1%P/S. 10%FBS的DMEM
之後我發現medium的顏色變化很快速 所以我必須每天換含insulin medium
我的問題是 不知道是否當初day 0的細胞就太滿(9成以上甚至全滿)
還是我的induction medium某成分濃度過高
(我看過有些paper 用的insulin濃度是我的一半)
我發現細胞induction後 會快速增長 然後似乎失去adhesion能力 細胞會整片飄起
導致後來在每天換medium的時候 一不小心 細胞就整片飄起
我應該怎麼改進我的實驗流程?
現在只想到一開始要induction時的細胞就不要太滿
seeding細胞後到底要多滿作比較好呢?
可否請有做過的前輩為我指點迷津?謝謝你們^^
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