Re: [求救] 有人有用過T4 DNA polymerase嗎？
※ 引述《hsejotim (小石頭)》之銘言：
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: T4 DNA polymerase可以讓Sticky end平滑化(blunting)
: (有兩個不同的sticky end想要用blunting方式)
: 之後想ligation起來(T4 DNA ligase)
: 可是並沒有成功
: 想請問各位大大有誰用過的經驗或撇步
: 提供給我參考看看吧
: 謝謝^^
提供你一個方向
但我不曉得會不會成功
在molecular cloning裡
先70度加熱5~10min，使single strand(突出的一股)的部份不會自己黏起來
然後放冰上一下
之後再加入dNTP和T4 DNA polymerase，在37度裡培養15分鐘
你可以試試看...
可是我覺得，如果可以的話，把它們都弄成有同樣的restriction enzyme切點
sticky end應該比較好接吧.....
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◆ From: 163.14.184.57
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