[問題] 抽RNA後的回溶~

看板Biotech (生命科學)作者 (許小黑~)時間18年前 (2007/08/21 03:08), 編輯推噓6(6011)
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我的RNA sample抽完之後~~放在HOOD裡面~~ 風乾~大約3個小時有吧 (爬文有看見好像只要5分鐘) 透明後~加入30ul的DEPC-H2O回溶後~~冰在-80度C 三天後想說轉RT成ssDNA 可是卻發現我的RNA sample幾乎每一管都有~透明黏稠物~吸到TIP都會經常卡住~ 那應該是RNA吧~是我沒有回溶好嗎??~ 那應該如何回溶~??又應該如何避免此種情形?? 之後我用手一直彈一直彈也很難回溶~~(不敢VOTEX) 是因為風乾太久了嗎??? 我一直認為他應該就是RNA的pellete(感覺好像拼錯>.<) 因為我測完濃度發現~黏稠物較少的濃度測出來~似乎會比較高~~所以一直認是RNA ============================ 請有經驗的版友教導一下謝謝~~ 還有我用細胞用6cm dish培養~加入1cc REzol~來收的~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.113.128.237

08/21 13:04, , 1F
應該是可以重抽了~~風乾前盡可能把酒精吸掉的話
08/21 13:04, 1F

08/21 13:04, , 2F
頂多五分鐘就乾到爆表了
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08/21 16:29, , 3F
樓上說的沒錯~ 不用風乾太久..
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08/21 16:33, , 4F
之前也曾經乾太久..加一堆 DEPC 水
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08/21 16:35, , 5F
外加 vortex 快半小時...還是不溶 = =
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08/21 16:42, , 6F
原PO抽的應該已經乾過頭了~~3小時~~溶的了應該也沒辦法用
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08/21 16:44, , 7F
重抽比較快QQ
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08/21 18:48, , 8F
不過我還是繼續測好RNA濃度之後~取1ug跑完RT了~
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08/21 18:52, , 9F
測完的ssDNA濃度都很平均1.65ug/ul左右~
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08/21 18:53, , 10F
這樣我的檢體會有問題媽??
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08/21 19:21, , 11F
這就要扯到分生第一定律了
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08/21 19:21, , 12F
"有結果就是對的方法"
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08/21 19:22, , 13F
不過RT之後測DNA濃度不太準,還是先往下做吧
08/21 19:22, 13F

08/21 19:23, , 14F
抽乾時間短一點 量多質好 就算最後沒有結果也比較不心需딠
08/21 19:23, 14F

08/21 21:23, , 15F
我怕的就是RNA沒有均勻溶解`所以我所測到的濃度的RNA~
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08/21 21:25, , 16F
是比較容易溶解的RNA~例如一些長度比較短的RNA會先溶解꜠
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08/21 21:26, , 17F
這樣我RT轉出來的`並非是均勻基因的RNA~而是某些特定的
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文章代碼(AID): #16oUR5kC (Biotech)
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