Re: [問題] 關於EMSA的基礎問題-新手
看板Biotech (生命科學)作者McRay (Disgusting human(彈走))時間18年前 (2007/09/03 17:21)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串4/4 (看更多)
※ 引述《maoneko (mao)》之銘言：
: 最近老闆要做EMSA
: 用的是Pierce的Kit
: 因為完全之前沒接觸過
: 有些基礎的問題要請教一下~~
: 1. 為何native gel 要當天現做現跑
: 不能像SDS PAGE可以前一天做好?
我的經驗都是前一天晚上做，或是當天做都可以
: 2. 為何loading之前要先Pre-run?
可能是先以低電壓(如10-20V)讓所有的probe卡在well的底端附近
因為在低電壓下probe在gel泳動率很低，所以先用低電壓pre-run可能會有
類似跑SDS-PAGE雙層GEL的結果。如果不PRE-RUN，我的結果也會比較糟(僅供參考)。
: 3. 為何transfer之前時，要先把membrane先泡在0.5X TBE
: 而不是transfer buffer?
: 勞煩各位解答了 謝謝~~
--
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