[求救] Ni-NTA純化His-tag fusion protein的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (我要藍藍淡淡的天空)時間18年前 (2007/12/27 20:06), 編輯推噓4(402)
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我是買Qiagen的Ni-NTA的resin來純化 用Batch purification 使用的wash buffer有三個 分別含有20 50 80 mM的Imidazole 每次都洗4倍column體積的量 現在的問題是在於.. 我純化完後取一點來跑PAGE 發現最後的elution fraction的protein 還是沒有我想像中的純..就是除了主要的band以外在上下還有一些小雜band 不過雜band沒有很明顯..但是還是看得出有band 請問我要怎麼增進我純化的純度呢?.. -- 上帝曾經說過 : 當一個人打你右臉的時候 你就要用日耳曼背橋摔壞它的左臉 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.137.56.129

12/27 22:43, , 1F
減少resin的量
12/27 22:43, 1F

12/27 23:07, , 2F
很正常.....用His-tag系統純化會比較髒一點點
12/27 23:07, 2F

12/28 13:46, , 3F
請教一樓... 為什麼?
12/28 13:46, 3F

12/29 23:12, , 4F
一樓的目的是想讓resin saturation..這樣的話雜band減少
12/29 23:12, 4F

12/29 23:13, , 5F
且Qiagen的NI-NTA我記得1 c.c有十個mg以上的binding量
12/29 23:13, 5F

12/29 23:14, , 6F
應該對吧...aggaci學長?? ^_^
12/29 23:14, 6F
文章代碼(AID): #17SvKr0N (Biotech)
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