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[請益]　如果Primer的GC contant太高會怎麼樣嗎？

看板Biotech (生命科學)作者時間18年前 (2008/01/09 10:03), 編輯推噓4(4推 0噓 3→)
留言7則, 3人參與, 最新討論串1/1
如題，最近要設計一對Primer～基本上Forward的地方沒有什麼問題， 但是要設計reverse的那個片段GC contant非常高，若以20 bp裡面GC就佔了70%以上。 請問如果Primer的GC contant高出70%以上會造成什麼不良影響嗎？？？ 還是說頂多就是黏合溫度設定高一點而已？　謝謝 PS.我要增幅的片斷預計是450~475 bp -- 幸福 應該是建立在彼此的信任 而不是金錢的依賴 是讓彼此做對方的第二雙手 而不是要對方當隻聽話的狗 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.196.232
推
01/09 10:21, , 1F
PCR時會容易打不開,可能會做不出來或是不漂亮!!
01/09 10:21, 1F
推
01/09 11:02, , 2F
加 DMSO 可以讓二級結構比較容易被解開~~
01/09 11:02, 2F
→
01/09 11:03, , 3F
之前有做過 GC 佔 85% 左右的~~ 還蠻 ok 的^^
01/09 11:03, 3F
推
01/09 11:30, , 4F
通常會要求primer pair之間GC值不要差太大,GC高就要一起高
01/09 11:30, 4F
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01/09 11:33, , 5F
不過還是做得出來,但是與其去try條件,不如在一開始就設計好.
01/09 11:33, 5F
推
01/09 12:36, , 6F
另外要是你用DNAMAN設計的話,primer數值不是worth都可以P出
01/09 12:36, 6F
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01/09 12:38, , 7F
打錯...是primer select,不是DNAMAN =.=
01/09 12:38, 7F
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