[求救] EMSA 的基礎問題
最近要幫lab的其他研究生做EMSA 因為他一直做不出來
老師已經失去耐性了
我之前也沒有做過 這兩天在研究potocol
想請教一下大家的意見
首先dsDNA 我看古人的設計只有25bp (之前的postdoc看paper做的)
請公司替我們label biotin之後泡成400uM的濃度
問過隔壁lab的人 他們告訴我就用40 nM forward 50 ul + 40nM reverse 50 ul
所以這樣我的final 濃度就是20nM (這樣對嗎??)
上面蓋上礦物oil 然後放在一個兩L的水中加熱
水滾了之後兩分鐘 讓他自然冷卻 O/N
pierce上面建議biotin-labled DNA放4fmoles
所以我就是20nM放 2 ul 就應該會是4fmoles
我的疑問是
大部分的核蛋白都是放多少阿
蛋白和DNA的比例到底是如何制定出來的??
還有古人設計的25 bp會部會太小了一點阿 會有什麼二集結構的問題嗎??
我看上面還有很多optimal用的reagents
我是想說先至少看到band再說
請有經驗的大大分享一下經驗
有關於DNA vs protein的比例
想要第一次就做成功阿......
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