[求救] 有關蛋白degrade
小弟最近在做一個蛋白
我做的蛋白有接GST 是用 pGEX-4T-1 vector 表現
用的菌是BL21(DE3)
經過純化的結果 我發現我這個蛋白degrade超嚴重
至少有50% 以上 可能到70~80% 都degrade掉了
本來在37度養到O.D 600 > 1.0， 在25度 induction，IPTG濃度 1mM
後來我有做不同induction的時間 其實和一般protocol差不多
在三小時後就會有蛋白表現 只是 它瘋狂degrade
現在是在25度養 18度induction 這樣做似乎沒有改善太多
所以想請教各位大大
有沒有人做過蛋白也會degrade的 是怎麼解決的
我目前能想到的就是應該換其它的strain 來表現？
有人知道有什麼strain可以表現這種難搞的蛋白嗎？
或是 再改溫度、IPTG濃度？
還是遇到這種情形只能硬做？ @@"
我只是想參考下有經驗的人 解決的方法
謝謝各位了~~~~~
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