[問題] western blot中的DNase和phosphatase.....

看板Biotech (生命科學)作者 (墮天使)時間18年前 (2008/01/30 22:49), 編輯推噓4(406)
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前面有人提過如果破cell太暴力,連核膜都破掉,genomic DNA跑出來會干擾loading和 定量,所以要加DNase,請問這是指說用non ionic detergent的情況下嗎? 譬如說用SDS當lysis agent,就算外加DNase不也都denature了嗎? 另外那篇文章說sample數目太多,用syringe會OX#$!@#! 那除了sonication以外還有更好的方法除掉genomic DNA嗎? 或是有辦法讓genomic DNA一開始就不要跑出來嗎? 第二個問題也是enzyme,就是讓很多人頭痛的phosphatase。 tkmax說一收完sample立刻定量跑膠,「一進-80冰箱保存的話就都會degrade掉了」 phosphatase不也是一種protein嗎?而且磷酸根本身也是共價鍵,一般高溫或物理手段 也不應該那麼容易打掉它,那在有「SDS or -80度」的情況下,為什麼磷酸化蛋白 還能那麼容易degrade呢? 最近開始要學western,麻煩各位指點一下,謝謝。 -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.3.78

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phosphatase的問題可以加inhibitor
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tkmax的意思是加inhibitor也沒用....
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哪篇?
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兩篇都看到了- -a
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genomic DNA的問題從沒遇過 不過像下面另一篇講的
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sonication的方式有差(個人喜好手動打) 
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phosphatase的問題 沒做過沒加inhibitor的對照XD
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tkmax不是說沒加inhibitor....而是加了"還是效果不好"吧?
01/30 23:39, 8F

01/30 23:51, , 9F
效果不好的問題..目前為止我的anti-P-S/T signal
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01/30 23:52, , 10F
都很強 而且還有經過IP的摧殘- -a
01/30 23:52, 10F
文章代碼(AID): #17e8vrOF (Biotech)
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