[問題] western blot中的DNase和phosphatase.....
前面有人提過如果破cell太暴力,連核膜都破掉,genomic DNA跑出來會干擾loading和
定量,所以要加DNase,請問這是指說用non ionic detergent的情況下嗎?
譬如說用SDS當lysis agent,就算外加DNase不也都denature了嗎?
另外那篇文章說sample數目太多,用syringe會OX#$!@#!
那除了sonication以外還有更好的方法除掉genomic DNA嗎?
或是有辦法讓genomic DNA一開始就不要跑出來嗎?
第二個問題也是enzyme,就是讓很多人頭痛的phosphatase。
tkmax說一收完sample立刻定量跑膠,「一進-80冰箱保存的話就都會degrade掉了」
phosphatase不也是一種protein嗎?而且磷酸根本身也是共價鍵,一般高溫或物理手段
也不應該那麼容易打掉它,那在有「SDS or -80度」的情況下,為什麼磷酸化蛋白
還能那麼容易degrade呢?
最近開始要學western,麻煩各位指點一下,謝謝。
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太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭,
這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。
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