[討論] transfection時plasmid的大小
把一個基因的plasmid(A)跟pEGFP-C1 cotransfect (electrophoresis)
到B細胞後(4ug:1ug)，取出部分細胞，利用FACS計算GFP positive的細胞約有10％；
但同一批細胞，利用可以認A的抗體做immunofluoresence，
再用FACS分析，有染到A的細胞卻只剩1％，
疑問是：cotransfection應該有GFP的就會有A表現才對，尤其A的量又比GFP多，
但為何GFP有10％，A卻只剩1％ 。
有同時用表現A的stable cell當positive control，
它100％都有染到抗體，所以抗體跟染色方法應該沒有問題。
甚至有用FACS 先將GFP+/GFP- 的細胞分別sorting出來，再染A，
染完的細胞再跑一次FACS，結果GFP-的細胞完全沒染到是符合預期的，
GFP+的細胞卻也只有30％染到A。
這問題不知道各位有沒有遇過呢？
有聽過人說plasmid大小會影響efficiency，A的plasmid大小為9kb，pEGFP為4.7kb，
A是比較大，但efficiency真的是因此而差這麼多嗎？有點難以置信。
這個問題困擾很久了，感激各位！
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