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請問一個關於蛋白純化的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (阿矇)時間18年前 (2008/02/14 17:23), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
留言12則, 3人參與, 最新討論串1/1
在精華區看過後我看到有板大提出gradient elution的方法 想請問一下在怎樣的情況下須要做gradient elution? 他的方法大概是怎樣?起始imidazole濃度大概要多少 另外wash buffer的量要多少呢? 另外想請問一下各位板大 在Novagene的純化手冊上 以及之前曾聽說過在elution時所使用的imidazole濃度為100mM~250mM 想請問為何etlute buffer的濃度是一個範圍而不是直接選擇最高的濃度進行 elution的動作呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.55.220
推
02/14 19:56, , 1F
一切都是case by case..你要先不停的用少量去測試條件
02/14 19:56, 1F
→
02/14 19:57, , 2F
抓好一個最恰當的條件就可以了..當然你純化目的不同也
02/14 19:57, 2F
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02/14 19:57, , 3F
會有不同的需求..起始imidazole用10~20 mM試試
02/14 19:57, 3F
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02/14 19:58, , 4F
接者可以試40 80..大多100多就都流光了..也有到250
02/14 19:58, 4F
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02/14 19:59, , 5F
wash的量一樣要自己抓..可以先試試4倍column體積
02/14 19:59, 5F
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02/14 19:59, , 6F
不夠乾淨就再洗多一點..就是這樣..一步一步去找條件吧
02/14 19:59, 6F
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02/14 20:00, , 7F
我說的10~20 40 80是wash的..elution從100開始吧..
02/14 20:00, 7F
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02/14 20:00, , 8F
elution也可以直接都用最高的條件去洗..只是有的很神奇
02/14 20:00, 8F
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02/14 20:01, , 9F
100被洗出來..250洗不太出來(我聽人說的)..一切都是謎阿
02/14 20:01, 9F
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02/15 00:31, , 10F
感激T.T
02/15 00:31, 10F
推
03/03 21:53, , 11F
我們實驗室是用500~~~哈哈哈哈!!!可以去參考一些論文應該有幫
03/03 21:53, 11F
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03/03 21:54, , 12F
助!!!
03/03 21:54, 12F
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