Re: [方法] 問有關FLOW細胞處理的問題
看板Biotech (生命科學)作者artichoke (summerblue)時間18年前 (2008/03/12 22:34)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/2 (看更多)
這些抗體(B cell/ T cell marker及MHC II)是再來要染FITC作為二抗嗎?
如果是的話，我們實驗室常常是先固定起來，
一個星期之內上機分析，螢光都不會degrade得太嚴重。
(但我們實驗室是做別種動物的phenotype分析，不是老鼠)
固定的方法非常簡單：
染完二抗之後，cold PBA清洗三次，
直接加冰冷的1% paraformaldehyde in PBS固定之後放入冰箱避光保存即可。
但強烈建議，1% paraformaldehyde是要新鮮稀釋的。
我個人的習慣是以10%的當作stock，要用的時候再用PBS稀釋即可。
※ 引述《cathy17e (...)》之銘言：
: 各位板上的前輩們
: 幫幫我吧~~!!!!
: 事情是這樣的,我們現在要將老鼠脾臟細胞取出來
: 然後染Ab去看他脾臟表面的B-cell,T-cell及MHC2
: 問題來了...
: 因為犧牲的當天無法馬上上機去測Data
: 我想請問一下
: 假如要用Paraformaldehyde(PFA)去fix細胞的話
: 應該要怎麼做呢?
: 還是有其他更好的方法
: 可以在隔天上機測時不會影響data的表現
: 麻煩各位前輩解答....
: 謝謝了!!
--
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◆ From: 118.170.111.38
※ 編輯: artichoke 來自: 118.170.111.38 (03/12 22:36)
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