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[求救] 2D

看板Biotech (生命科學)作者 (日子過的真快阿)時間18年前 (2008/03/10 14:45), 編輯推噓3(3推 0噓 8→)
留言11則, 4人參與, 最新討論串1/1
最近做2D 銀染完的gel變成一塊相當美麗的昆布 漂亮到想拿去熬湯... 整片gel跑出來的點很少 數一數大概六七個... 因為染不出點 所以染很久 所以marker黑道發亮... 想請問一下 這可能是哪裡出問題? 順帶一題 buffer都是現配的... 下面是配方: 1. Fix:50% methanol 25% acetic acid 2hr 2. 30% methanol for 15 min 3. ddH2O 5 min 3 times 4. 0.8mM Na2S2O3 for 2 min 5. ddH2O 5 min 3 times 6. silver:0.2% AgNO3 for 25 min 7. ddH2O 30 sec 2 times 8. Develop:0.28M Na2CO3 0.016mM Na2S2O3 0.0183% Formaldehyde 9. wash briefly 10. 0.042M Na2EDTA 10 min -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.92.59
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03/10 14:49, , 1F
昆布PAGE是因為醋酸沒洗乾淨的關係~~~想當初我也是ㄧ樣
03/10 14:49, 1F
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03/10 14:50, , 2F
很怕被別人看到...好丟臉....
03/10 14:50, 2F
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03/10 14:51, , 3F
2D是個很難搞的實驗，原PO加油！
03/10 14:51, 3F
推
03/10 18:01, , 4F
你清洗的步驟沒做好..就像一樓說的!!這步做好~~你的gel會很
03/10 18:01, 4F
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03/10 18:02, , 5F
漂亮~~~~當初也是沒注意清洗的步驟~像昆布一樣!原本該有的
03/10 18:02, 5F
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03/10 18:02, , 6F
點....因為背景太黑也看不到~~~
03/10 18:02, 6F
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03/10 18:03, , 7F
如果這個解決還沒有點....你萃取的方法可能有問題!要修改~
03/10 18:03, 7F
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03/10 18:04, , 8F
剛看到~~~"因為沒點所以染很久" 應該是一開始萃取就出問題~
03/10 18:04, 8F
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03/10 18:05, , 9F
染太久....膠一樣會過黑甚至你的蛋白質點會反白(銀)~~
03/10 18:05, 9F
推
03/10 22:39, , 10F
開始跑之前有沒有先定量？你跑多少蛋白呢?
03/10 22:39, 10F
推
03/11 17:12, , 11F
如果培養基中糖份沒去除乾淨也是可能糊糊的樣子
03/11 17:12, 11F
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