想請問大家這樣western的結果代表怎樣情況
之前我將一個inclusion body(vector:pET30a host cell:E.coli Novablue(DE3) )
用Urea(6M) denature後去給濁水溪作多株抗體 之後做western時發現:
control = pET30a/Novablue(DE3) :0.5mM induce 5hr 在his tag的地方有detect到
(這我覺得OK)
但是我當初表現來純化的clone: pET30a+insert//Novablue(DE3) :0.5mM induce 5hr
除了在major band外還有一堆像是smear的band(上下都有)
我自己是認為這些band不是因為抗體不購專一,而是因為蛋白表現得太誇張,所以
才會有這樣恐怖的景象~因為如果說是因為當初我純化給濁水溪作抗體的蛋白不夠純
包含了host cell本身的蛋白,那我的control也應該要出現一堆雜band才對
可是我的control是沒有雜band的....
濁水溪的技術大哥是跟我說...有可能是我當初純化的那個蛋白跟MP有interaction
所以才會這樣......不知道有沒有人可以給我一些想法呢?
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