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[求救] protein induction的結果一直很奇怪

看板Biotech (生命科學)作者 (尋找)時間18年前 (2008/05/16 15:39), 編輯推噓3(3推 0噓 3→)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
最近在做induction實驗 用的是pET23a vector host用過BL21(DE3)跟pLysE兩種 IPTG final濃度是1mM induction條件是37度C或30度C 三個小時 (五個小時也有try過) protein size大約47kD 可是每次做出來的結果都是 沒有加IPTG的 BAND的強度都比有加IPTG來的強 加了IPTG整條lane的band都變弱了 而且看起來好像是沒有induction出來 因為沒有很明顯粗粗的一條band 推測的size 附近確實也有band 可是就像上面說的結果 不管是空的host(沒送plasmid) 或是沒有induction的 都比有induction的BAND來的強 已經試過很多次都是這樣了 實在不知道是哪裡出了問題 可以請大家給我一些建議嗎? 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.77.129
推
05/16 16:33, , 1F
1.IPTG 降至0.1mM(做dose dependent看看，可能蛋白有毒
05/16 16:33, 1F
→
05/16 16:35, , 2F
2.用pLys 表現看看是不是蛋白leakage對BL21有無毒性..
05/16 16:35, 2F
→
05/16 16:36, , 3F
請問蛋白有毒與否 可以從那些方面看的出來呢?我induction
05/16 16:36, 3F
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05/16 16:37, , 4F
的protein 是屬於lectin的一種protein
05/16 16:37, 4F
推
05/16 16:40, , 5F
看paper protein有無antibacterial activity..
05/16 16:40, 5F
推
05/29 00:27, , 6F
protein是soluble form就有做的價值
05/29 00:27, 6F
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