Re: [求救] 想請問測posttranslational modificati …

看板Biotech (生命科學)作者 (^^y)時間18年前 (2008/06/20 13:49), 編輯推噓3(302)
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※ 引述《ycmi (you can make it)》之銘言: : 想問欲利用wetern blot去測某protein的posttranslational modification,例: : phophorylation or acetylation...etc.時,在收lysate或處理sample時,不知有 : 經驗的前輩們對於這個步驟是否該注意些什麼事情?例如,要避免什麼動作或應該 : 做什麼動作or加什麼lysis buffer等,才可以容易看到modification?或是才不會破 : 壞我想要看的現象?謝謝! :) acetylation我不清楚,如果是要看phosphorylation,lysis buffer裡面要加 protease inhibitor, phosphatase inhibitor 像是 sodium vanadate, PMSF, antipain.....等。當然準備的過程全程放冰上是需要的,不過煮完以後 就不要放冰上了,不然sds會沈澱。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.56.130.95

06/20 14:12, , 1F
拼錯了,是phosphatase, 常有的PPaseI有NaF, Na3VO4, b-gly
06/20 14:12, 1F

06/20 14:14, , 2F
或上網找PPase inhibitor cocktail,許多公司有,但是比較貴
06/20 14:14, 2F

06/20 14:16, , 3F
acetylation可用Sodium Butyrate(NaB)或TSA等,前者常用便宜
06/20 14:16, 3F

06/20 14:18, , 4F
當天準備完當天跑 要冰要冰-80
06/20 14:18, 4F
※ 編輯: puec2 來自: 61.56.130.95 (06/20 18:47)

06/20 22:24, , 5F
如果已經用super lysis buffer收,還需要inhibitor嗎?Thx!:)
06/20 22:24, 5F
文章代碼(AID): #18MqJjpo (Biotech)
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