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[求救] 抽RNA使用DNase

看板Biotech (生命科學)作者 ( )時間17年前 (2008/07/16 14:45), 編輯推噓6(6推 0噓 8→)
留言14則, 4人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
再抽RNA上面,原本學長都是使用Qiagen這套KIT 但我在使用後發現,這套KIT蠻好上手但其作DNase處理是在filter上 所以還是有些DNA殘留,但最大問題還是抽出來的total RNA量不夠多 所以有算用Trizol來做,我現在實驗主要是做RACE,找出cDNA全長 我想請問的是,一般大家再抽RNA會在特別用DNase處理,然後要如何除去 第二就是一般在做RACE時使用的total RNA會做DNase的處理嗎? 感謝大家的幫忙^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.137.132.169
推
07/16 15:07, , 1F
沒用過,但是我不是用kit做的...
07/16 15:07, 1F
推
07/16 15:28, , 2F
DNase處理應該算是必要的步驟
07/16 15:28, 2F
推
07/16 15:40, , 3F
基本上步驟越簡潔的方法加的必要性越高
07/16 15:40, 3F
→
07/16 15:42, , 4F
用kit抽一定會比你用傳統mannual的方式還要雜,而且kit通常量
07/16 15:42, 4F
→
07/16 15:43, , 5F
不大,要取多量RNA建議用傳統方式抽...
07/16 15:43, 5F
→
07/16 15:45, , 6F
當然你也可以一次做很多管再混在一起,比較貴而已...
07/16 15:45, 6F
→
07/16 16:11, , 7F
應該也要DNase處理,但用Trizol,還需要另外買什麼來去除
07/16 16:11, 7F
推
07/16 16:24, , 8F
沒了吧,DNase已經是最廉價的方法了...
07/16 16:24, 8F
→
07/16 16:25, , 9F
如果還是怕的話用mRNA column純化完再做RACE最乾淨
07/16 16:25, 9F
→
07/16 16:26, , 10F
但是我覺得沒有那種必要性,一般total RNA就做的出來了
07/16 16:26, 10F
推
07/16 17:03, , 11F
一般作RACE的RNA要求完整性，處裡時間越短，降解的越少，
07/16 17:03, 11F
→
07/16 17:04, , 12F
這樣去做RT cDNA比較完整..5'比較不會接不上adaptor
07/16 17:04, 12F
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07/16 18:13, , 13F
非常感謝大家的回答^^收穫很多
07/16 18:13, 13F
推
07/17 10:29, , 14F
除非你mRNA很長,不然1~2K的長度在保存良好的狀態下降解率低
07/17 10:29, 14F
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TONY1
17年前, 07/16
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