Re: [求救] IPTG誘導E.coli產生綠螢光

看板Biotech (生命科學)作者tsubasawolfy (悠久の翼)時間17年前 (2008/07/26 11:46)推噓4(4推 0噓 3→)

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※ 引述《onlyone0419 (期待)》之銘言： : 由於這株菌是別的實驗室給的(要拿來做phagocytosis) : 目前聯略不到給我這株菌的學長@@ : 只知道當初說要加 1mM 的 IPTG 來誘導 : 請問有大大知道 : 是要養菌的時候就直接加下去嗎? : 還有是要誘導多久 = = : 怕養太久會產生太多protein : 感激<(__ __)> : ps:老師說養太久會產生太多蛋白或是菌會太老... : 可是我只養10小時啊@.@...會太久嗎? 我看很多人都是養10小時以上 : 0rz 最普通的方法... 1.先用養菌管養你的菌養充足 (這看各個實驗室傳承的時間科科) 2.抽取適當的菌液量到你準備induction的培養瓶中加之前取1mL當測OD的blank (抽多少量...一樣看你們實驗室前人經驗沒有的話去找vetor製作商應該都有online protocol) 之後每隔一段時間測OD600 OD值大概0.4-0.6就會加入IPTG(這也是看各實驗室或看vector) ps 1.2步驟都要加antibiotic 3.加入IPTG 4.加入後每隔一小時取1mL 起來離心收pellet (收完記得插冰上..) 5.通常大概4-6小時(看vector能力..) protein就應該已經最大量 6.把步驟三的那些pellet拿去跑SDS-PAGE 然後染膠 (最便宜的Commasive blue應該就好了要用silver or sybro你高興就好ˋ(′_‵||)ˊ) 看你的protein在第幾個時間點就達到最大量之後就用那個時間點就好 pellet怎麼跑的話....1XSDS sample buffer加下去攪一攪煮一煮就可以load well -- EVA-RETAKE══════════╬SPHRYU ASUKA LANGLEY ◣ thePainter Wenn "Liebe" heißt,dieses Versprechen bis zum Tode ▎◥ ◥ ◣ nicht zu brechen...dann verspreche ich: ◣ ▍ ▁▃▄▅▄▃◥ dich immer zu lieben,und keinen Mann außer dir, ◥◥ ▌ ▇▌ ◥▆▅◢◥ solange ich lebe.Alles an mir...von Kopf bis Fuß, ◥▋ ▋"▅ ▁ sogar jedes Haar auf meinem Kopf gehört dir. ◥ ‵▆▆▇ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.201