[求救] Plamid 泡過 buffer在跑膠變成smear...
我用NEB的enzyme EcoRI 和 SpeI 做double digestion
切載體欲切下1KB (NEB buffer 2)
結果有切下預期的band
然而載體卻像是變成碎片, 原先約8k 的plasmid 變成200bp~ 5k 的smear
即使我換了NEB 的表, double digestion 建議使用的 NEB buffer EcoRI
仍然是一樣的結果
後來發現:
1. 把 DNA (來自mini prepare)
泡在 1X Buffer EcoRI, 37度C, 1hr, 跑膠, DNA 就變成 smear
(不加enzyme)
2. 如果 DNA 加水, 37度C, 1hr, 跑膠, 還是能看到能看到清楚的兩個band
(看起來band 像比較正常的 plasmid supercoild 之band)
所以我猜測我使用的buffer 會使 plasmid 被切碎
總之DNA 爛爛的想挖膠都看不見明顯之band
或是預期之band 微弱, 取而代之的是smear 一大片
不知道有沒有人遇過類似的情況?
可能是什麼原因?
感謝任何建議或意見
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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