[求救] pcr一直失敗?

看板Biotech (生命科學)作者 (或許天堂也常日落)時間17年前 (2008/08/30 16:55), 編輯推噓2(204)
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最近我的實驗(定序)不知道怎麼搞的一直失敗 而我也一直找不出原因來---我真的以為我的實驗中邪了!! 怎麼說呢~同樣的primer taq dntp buffer dna 及pcr條件 卻怎麼都跑不出同樣的結果(就在最近這一個月!!在那之前跑膠都很成功) 跑膠後發現我的pcr產物好像卡在load膠的洞口,因為照相出來的結果孔的地方很亮, 看起來就像是一條band! 本來我以為是dna有問題 於是用了別的primer嘗試 但結果很漂亮(是single band) 以為是primer 有問題又重新合成 還是不行!! 麻煩大家指教一下吧~~我已經試了一個月 試到整個人都沒有再做下去的勇氣了!! 感激不盡~ p.s我做的是植物dna的定序 -- 我並不害怕,是你最終沒有娶我。我是寧願由你來負我,而我無法負你 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.75.55.226 ※ 編輯: rvnkhlnomgtl 來自: 211.75.55.226 (08/30 16:56)

08/31 01:13, , 1F
膠的well中有鹽離子,所以DNA下不來,可能是膠放太久
08/31 01:13, 1F

08/31 01:14, , 2F
跑之前用水沖well,你的膠是多少% ?
08/31 01:14, 2F

08/31 01:29, , 3F
膠沒有問題,因為marker有出來,而且我有放其他primer
08/31 01:29, 3F

08/31 01:30, , 4F
的產物放在同一塊膠一起跑..結果有跑出成功的BAND
08/31 01:30, 4F

09/02 01:49, , 5F
要不要試一下新的polymerase看看~~先跟其他實驗室借一下~
09/02 01:49, 5F

09/02 01:51, , 6F
有時polymerase放太久~~效率會變差!(時有時無的PCR反應)
09/02 01:51, 6F
文章代碼(AID): #18kGi6_8 (Biotech)
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