Re: [求救]請問10公分的dish可以加多少lysis buffe …
※ 引述《vita221 (vita)》之銘言：
: 最近開始收細胞要跑磷酸化的蛋白質
: 上一次做的時候發現 若先用PBS刮下細胞離心後再加lysis buffer
: 測蛋白質濃度時 蛋白質的量非常的少
: 因為要做time course的實驗
: 所以收下來的細胞泡在PBS裡的時間比較長
: 所以我在想是不是因為這樣 所以蛋白質被分解掉了
: 所以想請問大大們
: 如果我直接加lysis buffer的話
: 要加多少的量下去刮呢?
: 或者是有其他更好的方法呢?
: 謝謝!!!
原po的問題應該是想測不同time course的蛋白質profile吧
大部分都是用PBS洗掉medium去除不必要變因
抽protein之前應該都會先測細胞數吧
細胞數夠的話 不妨可以考慮PBS刮 =>PBS WASH => LYSIS BUFFER DEGRATE
大部分應該都是收1*10九次方細胞吧
我自己這樣做(再沒給藥情況下) 最少會加20-50ul lysis buffer
PROTEIN CONS一定夠作WB 或2d
我自己通常是喜歡固定細胞數啦 如果細胞量不夠的話
可能要考慮多養幾盤(這種情況可能會發生再給藥時候)
我之前做給藥的 是先養到大概1*10的6次方 才給藥做time coursre
時間拉的夠長的話 應該都沒問題 不然就是你給藥的濃太高度
或是你想做的是段時間的
以上給你參考 看看 有錯請指正
==========================================================================
另外 我是覺得測濃度的問題會比較困擾我
如果PBS殘留的話
比較會引響BSA 或BCA
以上是我的一些經驗
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 69.219.144.199
※ 編輯: slash7788 來自: 69.219.146.74 (08/31 11:23)
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
138
258