Re: [求救] 請問有人做過抽膜蛋白的實驗嗎
※ 引述《teddybear209 (慧慧林)》之銘言：
: 請問有人做過抽膜蛋白的實驗嗎
: 有kit可以直接抽嗎
: 是否
: 可以提供網站或protocol?
: 謝謝
kit頗貴 分享一下較一般的做法
用imidazole buffer(0.3M sucrose,25mM imidazole,1mM EDTA,pH7.2)把細胞刮下
並離心1000g,4度西,5 min
pellet用1.5 mL imidazole buffer resuspend cells
把均質機調成1250rpm 來回緩慢打五次
接著離心4000g,4度西,15 min
取supernatants
把pellet在拿去做以上的動作在收一次supernatants
接著把supernatants離心200000g,4度西,1 hr
收下來的呈有點黃透明霧狀pellet就是membrane protein
有學姐說用6M urea回溶還頗快的
想請問回溶這一步 大家用什麼buffer回溶?
謝謝~~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.92.61
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 3 之 3 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章