[求救] RT-PCR 問題

看板Biotech (生命科學)作者 (w23w)時間17年前 (2008/09/29 23:11), 編輯推噓6(606)
留言12則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
各位先進大家好: 我在做RT-PCR部分一直都做不出來, RNA 品質也都有1.8左右在做RT 時有把轉出的cDNA拿去測260nm 吸光值約1.4左右(一百倍)進一步做 PCR時測吸光值也有0.33(稀釋一百倍) 但是跑膠時marker可以看到 但是要看的基因像是beta-actin,COX-2都沒有band 但是吸光值都有 明顯的高於空白組的0.1, 但是就是照膠時看不到任何band...但是 之前做就有 條件也沒有改變過,用的核酸染劑與Loadinf buffer都 可以清楚的看到marker的band,本來也懷疑是蛋白質污染造成的偽 陽性吸光值,但是測260/280的比值也都有1.9,RT與PCR套組也是用 新的,請問板上的各位高手,一直很納悶為什麼吸光值有,但是跑膠 就看不到,但是marker 確有清楚的band呢!? 謝謝大家!! -- 昂首千丘遠 嘯傲風間 堪尋敵手共論劍 高處不勝寒 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.121.155.59

09/29 23:20, , 1F
為什麼cDNA跟PCR產物要測吸光值阿??是要測濃度嗎?
09/29 23:20, 1F

09/29 23:24, , 2F
actin都P不出來,可能某個環節有出了錯吧,可以重作一次看看
09/29 23:24, 2F

09/29 23:24, , 3F
或者找實驗室其他同學測試一下
09/29 23:24, 3F

09/30 01:13, , 4F
rt之後測吸光值是沒有意義的 你一開始的rna有沒有跑膠
09/30 01:13, 4F

09/30 11:30, , 5F
測吸光值是想比較P出來DNA的濃度 一開始RNA沒有跑膠
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09/30 11:30, , 6F
但是有測260/280 確認抽出 謝謝你們的回答!!!
09/30 11:30, 6F

09/30 12:57, , 7F
P完後直接去測嗎? 這樣裡面的拉哩拉紮的會影響吸光值吧?
09/30 12:57, 7F

09/30 12:59, , 8F
要是連actin都沒有,PCR沒問題,那可能RNA有問題吧?
09/30 12:59, 8F

09/30 13:38, , 9F
你還是先把RNA先拿去跑電泳看看~說不定問題就在RNA上!!
09/30 13:38, 9F

09/30 14:48, , 10F
電泳槽換新buffer,拿RNA跑DNA膠
09/30 14:48, 10F

11/11 01:01, , 11F
rt之後測吸光值是沒有 https://noxiv.com
11/11 01:01, 11F

01/03 16:45, 7年前 , 12F
但是有測260/280 http://yofuk.com
01/03 16:45, 12F
文章代碼(AID): #18uF0rNt (Biotech)
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