Re: [求救] 請問有沒有人用抽過動脈的蛋白質?
※ 引述《allisa (小晴)》之銘言：
: 我們是取rat的主動脈 要抽partein做western
: 請問有什麼辦法呢? 因為我之前用過的方法好像都不適用
: 之前做brain是直接用玻璃的有一個棒子 把lysis buffer加進去直接磨
: 細胞也是直接加lysis buffer作用30min離心即可
: 但是 動脈用磨的好像磨不碎 組織太韌了 出來的protein很稀
: 而且我們的tissue沒辦法很多 大概只有 1.5cm長而已
: 請問有沒有什麼特殊的方法可以抽出protein呢 謝謝
我是取mice的thoracic aorta來抽protein跑Western Blotting
我的tissue比你小又少的多 >"<
我們家是用Qiagen的Tissuelyser去打成Lysate
把取下來的aorta放進裝有Cell Lysis Buffer和Protease Inhibitor的2ml eppendorf
每管再加入一顆steal bead
然後放進Tissuelyser裡,frequency是25 times/sec
重複打到均質化為止
而aorta很好打到均質化,我同學做鼠耳有耳毛跟軟骨就很討厭
Qiagen的Tissuelyser長這個樣子 http://myurl.com.tw/c801
在打的時候很像搖泡沫紅茶 XD
aorta的total protein一定是比brain的少很多
但是主要是你的target protein訊號要出得來
不然就算total protein量再多都沒有用
--
╮ ‧ ﹒ ║ 、 。 ﹒ ’
║‧ ＊ ╪ ┼ ║ ╭═╮╠═╮╭═╮ ╔═╮╔═╮ ◣ ◢
║ ﹒║ ║ ║ ║ ╠═╝║﹒║╭═╣ ║ ║║ ║║ ║ ▕︵ ︵▏
╰═╯╰ ╰ ╰ ╰ ╰═╯╰ ╰╰═╰ ╠═╯╠═╯╰═╣ ▋= - = ▎
． 。 ． ╩ ﹒ ╩ ‘ ╰─╯ ▄▃▄
． ‥ ◣﹚
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.127.177.71
推
10/24 22:22, , 1F
10/24 22:22, 1F
我剛剛看了財產牌,上面是寫280000元 囧rz
推
10/26 03:20, , 2F
10/26 03:20, 2F
推
10/26 04:01, , 3F
10/26 04:01, 3F
我沒有用過戳戳樂(誤)
所以沒有辦法回答你這個問題 >"<
不過我想只要可以達到均質化的目的又不會污染的話,應該都是可行的
Ps.為什麼大家都可以推文,我卻不能推 /_______________\
※ 編輯: littlehappy 來自: 163.15.175.170 (10/29 13:49)
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
769
1488
92
140