[求救] 蛋白純化
小弟之前用GST tag表現一個蛋白質
表現量還不錯多 沒有inclusion body 但是它就是binding的效率非常差
beads完全是新的 我用的buffer 是PBS
我個人也有試過其它的buffer 包含Tris 加了一些detergent
然後 在破菌前也加了DTT final 濃度 5mM
到後來加了Urea 因為害怕把GST弄掛 所以只有加了一點點 大概0.5M~1M都有用過
我也check 過capacity 用另一個GST的蛋白來做control 發現不是capacity的問題
蛋白質binding的效率仍然非常差 (我也check過GST有接在蛋白上 有做過western)
所以我放棄GST 改用另一個system
我用了his-SUMO fusion 的system
使用的buffer是50 mM Tris pH 7.4 , wash用 300 mM NaCl 30mM imidazole
elute 用 300mM NaCl, 300mM imidazole
雖然我只有試了一次 但是我發現 它好像也不太binding 光用wash buffer就洗下來了
elute沒 什麼東東 flow through就一堆沒有bind
所以結果 好像也是不太bind到beads上
所以 有人有遇過像這樣不bind的問題嗎？ 我應該放棄用tag來純化嗎？！
改用一般其它離子交換、gel filtration、hydrophobic.....
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◆ From: 61.230.7.68
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