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[求救] RNAi and protein 拜託各位了...

看板Biotech (生命科學)作者 (俺真的不是王力宏)時間17年前 (2008/10/30 18:02), 編輯推噓3(3推 0噓 6→)
留言9則, 2人參與, 最新討論串1/1
請問各位大大.. 有沒有人針對細胞做RNAi之後.. 做real time PCR 確定 mRNA的表現量有被抑制下來(效率大概80~90%) 但是做western卻沒有抑制下來的現象... 理論上不是蛋白質的表現量會下降嗎??... 可是看起來怎會沒有啥改變?? 是我蛋白量用太多嗎??(小弟我蛋白跑50ug,大小21KD,跑15%的gel) 還是因為蛋白是膜蛋白,所以蛋白太穩定半生期太長嗎?? 還是我使用的一抗專一性太差... 還是real time PCR 數據錯誤? 還是有其他因素? 對了,我所用的細胞是有抗生素挑過的stable colony... 應該不太是因為Cell不純所導致的... 還是有其他方法(就是不用western的方法) 可以確定蛋白的表現.... 小弟已經為了這實驗已經糾纏了快一年了.. 拜託各位大大了!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.143.99
推
10/31 23:08, , 1F
activity?
10/31 23:08, 1F
推
11/09 23:49, , 2F
用RNAi你這問題常發生耶～你可以去基因體中心RNAi core
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11/09 23:50, , 3F
看看成果回報，其實很多你的例子，不過我還是覺得要
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protein量下降比較讓人放心@@.....
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11/09 23:51, , 5F
還有～我的經驗，用RNAi最好是做早期的細胞株，通常養越久
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knockdown效果越差～這是真的！本來有KNOCKDOWN
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11/09 23:52, , 7F
挑了stable clone又養了幾代～咦～怎麼跟CONTROL一樣了!驚!
11/09 23:52, 7F
推
11/09 23:56, , 8F
不過前幾代通常還OK.....恩恩 互相交流一下 我最近也因為
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11/09 23:57, , 9F
RNAi konckdown效果頭大很久@..@
11/09 23:57, 9F
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