[求救]大鼠冠狀動脈平滑肌細胞培養及鑑定問題
最近養細胞出了一些問題
可以請各位大大幫我看ㄧ下
以下是我的問題
1.大鼠冠狀動脈平滑肌細胞primary culture
我是用含有20%FBS DMEM去養它
可是它的生長速率真的很慢
幾乎養了五六天 6公分dish還長不滿 同ㄧ代放久了還會汙染
請問一下這樣的情形是正常的嗎
有可以讓它長快ㄧ點的方法嗎
2.平滑肌細胞染色鑑定
我是用我們家學長姐的方法(他們都說隨便染 都會成功 但是我染了3次都失敗了)
先用3%福馬林固定
再用含有10%FBS跟0.4% Triton X-100的buffer 去打洞和blocking
中間有用PBS wash
最後用PI染核
用monoclonal anti-actin clone AC-40 FITC conjugate(sigma,F3046)
稀釋50被去染alpha-actin
請問我的步驟有出什麼問題嗎
或需要改進的地方
或者各位大大有其他的protocol可以提供給我嗎
麻煩各位大大幫我看ㄧ下
謝謝囉
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