[求救] 關於western blotting用AP呈色的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (阿矇)時間17年前 (2008/11/25 10:02), 編輯推噓3(304)
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最近在做western blotting時老是碰到一個棘手的問題:就是當我的PVDF膜 在buffer中呈色時看起來我要的band是很分明的,但是一但離開buffer 先泡入一次水中稍微泡一下去掉呈色buffer,再放到衛生紙上晾乾時 隨著PVDF膜越來越乾,我膜上band本身呈色的部分卻會像是消失ㄧ樣 再一個完整的呈色部份像是出現蜂窩一樣沒呈色到的白點 我用了不同抗體也是會出現一樣的狀況 我的BCIP NBT都是現配的 我的呈色時間大概是20~30分鐘 有哪位板大也是有過相同情況的媽? 我以前沒有出現這狀況的... 是因為奶粉已經結塊的關係嗎... 救命 > < 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.173.161

11/25 22:49, , 1F
我用結塊的奶粉泡1抗,4度搖o/n,會長菌變綠色耶~
11/25 22:49, 1F

11/26 01:14, , 2F
沒錯~綠色牛奶!還很臭!
11/26 01:14, 2F

12/06 18:21, , 3F
PVDF乾燥後顏色會退,所以可以試著呈色時間久一點再stop看
12/06 18:21, 3F

12/06 18:22, , 4F
看會不會好一點,第二段看不太懂意思,不過有白點會不會是
12/06 18:22, 4F

12/06 18:24, , 5F
transfer時有氣泡之類的,不然就是blocking或一抗有東西沉
12/06 18:24, 5F

12/06 18:25, , 6F
澱在膜上卡住了吧
12/06 18:25, 6F

12/09 21:12, , 7F
謝謝您我再試試看^^!!
12/09 21:12, 7F
文章代碼(AID): #19ArpIFx (Biotech)
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