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[求救] 關於histone的western blot

看板Biotech (生命科學)作者 (要死了)時間17年前 (2009/03/19 13:16), 編輯推噓5(5推 0噓 4→)
留言9則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
最近想要用histone來當我實驗一部分的positive control 我是用whole cell lysate來跑western 然後用anti-histone的antibody去測 (anti-H3) 可是做了幾次都超乾淨什麼band都沒有 (cell: 293T lysate量大概是20ug/lane) 因為我之前沒有用過 想請問一下histone需要先做purification再測嗎? 我在想我測不到的原因是antibody的問題還是histone的量本來就很少 直接用cell lysate測不到 (應該不會是western的問題因為我同時有其它sample都有signal) 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.133.96 ※ 編輯: stool 來自: 140.112.133.96 (03/19 13:16)
推
03/19 13:35, , 1F
看哪一家的吧...不然就直接買純化過的當positive
03/19 13:35, 1F
→
03/19 13:36, , 2F
聖誕老公公的H1就用positive要求換兩次過
03/19 13:36, 2F
推
03/19 13:39, , 3F
Cell signal的r-H2AX根本是當H2AX用 老牌的upstate
03/19 13:39, 3F
→
03/19 13:39, , 4F
還是最佳選擇...另外20ug total lysate夠了..
03/19 13:39, 4F
推
03/19 15:42, , 5F
大部分histone都在cell debris,加HCl就可以看到很多
03/19 15:42, 5F
→
03/19 15:44, , 6F
詳細操作請翻閱upstate的sheet,不用急著換抗體
03/19 15:44, 6F
推
03/20 01:38, , 7F
我用聖誕老公公的H1超難壓~不是壓不出就是一堆雜band
03/20 01:38, 7F
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03/21 17:02, , 8F
thanks!
03/21 17:02, 8F
推
03/23 22:29, , 9F
據說 histon的pI值 好像低於(還是高於)一般的page
03/23 22:29, 9F
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