Re: [求救] IHC 不太順利
: 以antigen retrieval來說的話
: 用微波爐做為熱源應該是要盡量避免
: 因為受熱不均勻又有沸騰的問題
: 除了怕脫落外 buffer的濃度與pH也較容易改變
: 一般病理科都會買IHC專用的壓力鍋
: 市面上有賣專用的壓力鍋 不過那個一個好像四,五萬以上
: 省錢的做法就是用autoclave
: 如果你的機器可以選擇模式的話 要用液體模式 也就是降溫過程不會洩壓
: 即可到達retrival的溫度又不會使溶液沸騰 效果可以比得上壓力鍋
:
autoclave的時候 泡著真的會脫落 昨天我就沒有泡著
只是放在潮濕的buffer的鐵盒子裡拿去autoclave
當然 都沒有做出來 哀
後來我用微波爐加熱到沸 再把slide泡進去 過一分鐘後拿出
再把buffer微波到沸 循環了七八分鐘左右
也是沒有很成功ˊˋ
: block最好是用與二抗同源的血清 不過有些tissue用milk即可
: negative control 要用與一抗同源的血清
: positive control的話 這個難說
: 染不出來不一定是實驗步驟的問題 很多抗體是不能拿來做IHC的
: 請注意你的抗體是否有註明可用
: 我知道sigma有專門出IHC和tissue array專用的抗體 不過也比較貴一點
: 這網站還有個不錯的地方 就是它會告訴你哪些tissue或cell會是positive
: 請去想辦法搞來當作control
: DAB的話 加下去之後如果過了五分鐘還看不到明顯的黃核色
: 多半就不行了 放再久也會是false positive
抗體是學姊給的 好像是他自己純化出來以前拿去做western用的
我在跟他討論看看
我們都沒做過IHC@@
但是我想 抗體應該不會有問題吧@@
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