Re: [求救] 收蛋白的時候沒有wash
※ 引述《lovenainai (lovenainai)》之銘言：
: ※ 引述《light71317 ()》之銘言：
: : 想請問一下
: : 在做western blotting之前
: : 收的蛋白要是沒有先用PBS wash
: : 就直接加sds破細胞收蛋白
: : 這樣的話 收下來的溶液紅紅的
: : 會影響之後western blotting的結果
: : 或者是蛋白定量的結果嗎?
: : 還是都沒有影響!!
: : 只是跑出來的band會比較髒而已
: Medium 的成分是甚麼?
: 小牛血清 + DMEM 啊.....
: 血清不就是充滿蛋白質嗎....
我的經驗也是定量不準，明明沒啥細胞卻爆表的量......
我的medium是Basal medium eagle+10% FBS，我曾經拿medium當成SDS-PAGE的sample，
用coomassie blue看到在60kD左右有個超肥的bands，和BSA位置一樣。
然後更糟的是，二抗Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody #7076竟然會很歡樂的去
認這個bands，遇到target很弱的時候，相對背景就很慘了！
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.22.47
推
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