Re: [求救] 請問誰有MCF-7細胞 (台中)

看板Biotech (生命科學)作者reinherd (揚威利信徒萊因哈特)時間16年前 (2009/11/12 10:35)推噓2(2推 0噓 1→)

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我提共一下我解凍MCF7的protocol 給您參考一下我養MCF7已經快一年了這個protocol一直很好用 1. 細胞放置於37度water bath 至解凍馬上加入5ml media之中這一步一定要快因為細胞如果解凍的太慢極為容易死亡 2. 細胞+5ml media 再1000rpm下離心五分鐘離心後apirate上清液僅留下細胞pellet (已去除DMSO) 3. 用5ml 的media resuspend, 之後加到t-25 flask 此時細胞一定是漂的等24hr後再來觀察此時因該有不少細胞已經attach bottom 可以用PBS wash 掉尚未attach 的細胞(因該是死的) ※ 引述《cyin592 (矛盾是一些衣服、生活用 )》之銘言： : 之前查資料，內容有提到說MCF-7解凍初期易懸浮， : 當我解凍後24h要離心去掉DMSO， : 這時顯微鏡下看到的細胞都是飄的，離心後也不見有細胞被離下來， : 這樣是否可以判斷其實是細胞死了呢? : 我使用的medium是MEM+10%FBS+1%Pen/Strep : ※ 引述《greedman89 (天堂地獄)》之銘言： : : 依我們實驗室的方法來看其實DMEM（Dulbecco's Modified Eagles Medium） : : 買Hi-D-GLUCOSE & Hi-L-glutamine的在自行加上 1％的L-glutamine : : 還有1％的Pen/Strep 還有可以加入1％ Sodium Pyruvate : : 這樣應該就可以養得起來了 : : 另外就是就算是同一家做出來的血清可是因為是不同批的關係也會造成 : : 細胞培養的差異所以像我們家的話就會盡量大量進貨 : : 至於有沒有污染我想Mycoplasma最好還是驗一下看看用新的dish或是75T : : 隨便然後拿新的medium裝在裡面放到培養箱放個兩天然後拿去 : : 驗看看會比較保險因為其本身也有些抗藥性尤其是盤尼西林(penicillin) : : 還有一個考量的點就是培養基的pH值基本上都以中性為主 : : 7.2 - 7.3,可以倒一點出去用pH meter量量看基本上如果是買已經 : : 泡好的培養基那個它應該都已經調好了，但如果是要自己泡的那就 : : 要多注意一些了。不才的見解參考看看吧︿︿ -- 我的blog 歡迎參觀 http://www.wretch.cc/blog/reinherd -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 76.114.209.7