Re: [求救] ligation怎麼接都接不出來
看板Biotech (生命科學)作者davideason (Davideason)時間17年前 (2009/05/11 14:37)推噓3(3推 0噓 10→)留言13則, 5人參與討論串4/4 (看更多)
PCR cycles 數有點高 不過跟您的問題 相關性比較小
Invitrogen 的白金牌 Taq 應該只是準確性高的 Taq
沒有 proof reading (應該巴~大叔懶得查了)
這隻Taq 也不需要另外加其他的Taq 即可用來作 TA
所以
我猜問題是出在 competent cell
可能您用的那種因為insert 太大轉進去 cell的效率就很差
解決方式 要馬 作作 heat shock > 馬上插冰上 > 塗盤
結果 我猜 應該會改善
或者 建議您去買 RBC 出的 HIT Competent Cell (我們家 是跟惠眾買一隻80)
DNA 加一加不用 heat shock 就可以塗盤了
一整個好用
老實說 insert 3K 真的還好~ 我還比較害怕 80-90bp的小片段
祝您實驗順利
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.139
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