Re: [求救] 免疫螢光
※ 引述《daniel2806 (Tomorrow is another day)》之銘言：
: ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: : 你有作 positive control嗎？
: : 染個 cytoskeleton 之類一定會有的東西先
: 一般螢光的訊號很弱, 所以我建議用二抗接biotin
: 中間再用avidin-biotin將訊號放大, 最後先用DAB這種可見光的substrate來染,
: 若有染上馬上就能看見
: 另外, fix後的組織都會用citrate buffer, 100度煮個10~20分鐘, 讓抗原恢復
: 小小經驗
: 祝成功!!!
首先...lymph node或者spleen染不到的話就該考慮抗體的適用性了..
請先查查看paper裡大家用來染這些marker的antibody clone是什麼...
有些monoclonal antibody真的染不好甚至染不到..
再來就是二抗是不是有可能壞了...螢光conjugate的抗體有時後比較容易壞掉...
總之...spleen或者lymph node一定是要染出來的...雖然不同種tissue的染色條件不一樣..
但是那是個確定一抗沒有問題的方式...確定抗體可以用之後, 再去做在skin tissue上..
此外, 也稍微回應一下daniel2808的建議...biotin是好方法,
但是那個antigen retrieval (citrate buffer heating)在冷凍切片時是不需要做的...
以上~
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05/20 19:19, , 1F
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