Re: [方法] 請問MTT assay

看板Biotech (生命科學)作者leoblack (朋友看太重的猫)時間17年前 (2009/06/08 14:29)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《jabawork29 (氣定神閒)》之銘言： : ※ 引述《leoblack (朋友看太重的猫)》之銘言： : : (day) : : 種細胞 4 3 2 1 測MTT : : └-----┴----┴----┴----┴----┘ : :假設 A組 ------------------------------> 紅線是seeding後就一直養著的原medium : 假設 B組 ------------------------------> 黃線才是加入了待測的藥物 : : C ------------------------------> : : D ------------------------------> : 各組間各養兩盤細胞養到你要的時間就收其中一盤細胞計算細胞數 : 而另一盤就加你想使用之藥物濃度所作用的細胞數 : 這樣你可以掌控到當時的細胞數 : 不知道這樣有沒有回答到你的問題? 首先先感謝大家熱烈的回應~^^" 我還是來說明一下我的實驗好了我的實驗是要測試不同濃度的glucose(Glc)對細胞的影響實驗中,會用serum-free + 不同濃度的glc的medium來養細胞 (已有許多篇paper都是用serum-free的medium來做這實驗的所以可以不用argue這個condition了) 此外~我們會再加入刺激signaling用的ligand 當然還會加入soluble receptor來當competitor 所以我所用的medium有 serum-free serum-free +10%FBS serum-free Glc 20mM Glc 40mM medium medium medium medium 共4種medium 再搭配上 +ligand +ligand +solvent +competitor +competitor only only 也是4種condition 在不同時間點(1,2,3,4,5,6,7 day)分別去做MTT Day1 (day2~7以此類推) FBS Ligand Ligand+competitor solvant only competitor only serum-free Ligand Ligand+competitor solvant only competitor only sereum-free Ligand Glc 20mM Ligand+competitor solvant only competitor serum-free Ligand Glc 40mM Ligand+competitor solvant only competitor only 共有這樣的組別由於收的時間很長~牽扯到cell doubling time的問題且~也考量到96-well中~細胞的滿度問題~ 以及,這中間過程中~是否需要換新的condition medium?會了是否會有增幅效應? (因為此ligand所induce出來的signaling T1/2還沒有paper報導) 不過後來討論的結果是~把不同天的各自養一盤, 且同時有一起做正常medium(即含FBS)以及serum-free這兩種condition 所以就不用額外去考量細胞數的問題了不論是一起先換condition medium,不同時間收還是不同時間下condition medium,同一時間收都還有個基準值在可以來比較~ 不過~這樣子~還是沒有解決 1.細胞滿盤 2.是否需要更換condition medium 的問題~^^" 有人有更好的建議嘛?! 以上~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.165 ※ 編輯: leoblack 來自: 192.192.93.165 (06/08 14:30) ※ 編輯: leoblack 來自: 192.192.93.165 (06/08 14:37)