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[求救] Cell fraction assay by triton-x100

看板Biotech (生命科學)作者 (mikis1107)時間16年前 (2009/06/22 21:18), 編輯推噓4(4推 0噓 4→)
留言8則, 2人參與, 最新討論串1/1
爬文後發現有人也類似問題 但是我的問題比較複雜一點 (可能對於有做過這方面實驗的版友來說很簡單><) 讀到的paper將細胞分成好幾的部分來看 pellet-->CSK buffer(含0.1%triton)萃取-->離心後得到S1 sample 剩下的pellet2-->CSK buffer wash-->離心後得到W sample pellet3+DNase作用-->離心得到Ch sample pellet4+CSK(含0.5%NaCl+0.1%triton)-->離心後上清液S2 sample 下方p sample 一共分成五種sample 我的認知是: 1. S1 是cytosol中的蛋白? 2. W 是當control的wash buffer確保裡面沒有蛋白質? 3. Ch 應該是Chromatin part? 4. S2 是否為nuclear protein? 5. P 是否為細胞骨架蛋白? paper是有解釋一點點 但是我想問的是為什麼可以這樣分 每種溶劑是利用甚麼原理把蛋白分開的?? 從沒做過這方面實驗所以有點疑問 可以請有做過的人幫我回答一下嗎? 感謝感謝>< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.41.181.135
推
06/23 08:40, , 1F
附上paper連結 其他人會比較容易回答(這些buffer我都沒看)
06/23 08:40, 1F
推
06/23 09:01, , 2F
查了一下CSK buffer = cytoskeletal buffer
06/23 09:01, 2F
→
06/23 09:02, , 3F
其他還是請高人指點吧!!
06/23 09:02, 3F
推
06/23 10:13, , 4F
我覺得很難解釋，detergent的用法除了百分比外
06/23 10:13, 4F
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06/23 10:14, , 5F
還包括操作時的溫度，高或等或低張，細胞總數有關
06/23 10:14, 5F
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06/23 10:15, , 6F
如果你實驗室有pierce的目錄的話，可以看看前面
06/23 10:15, 6F
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06/23 10:16, , 7F
protein extraction的部分，寫的還蠻不錯的
06/23 10:16, 7F
推
06/23 10:21, , 8F
所以一樓是對的
06/23 10:21, 8F
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