Re: [求救] western blot 全黑

看板Biotech (生命科學)作者Mrbrowncafe (嬰兒)時間16年前 (2009/07/01 18:30)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《malakaki (神奇小馬)》之銘言： : 請問一下, 你的二抗比例, 牌子 : ECL 哪家的? P牌還是M牌? : 只有這抗體會這樣, 還是每種抗體都這樣? : CS牌的 caspase 3 不錯用, 是個幾乎沒有雜訊的好物 : 家裡只有這支是買CS的嗎? : 其他有哪些牌子呢? : ※ 引述《linwei (我會好好加油^^)》之銘言： : : 請益各位 : : 因為我第一次遇到這種情況@@ : : 我壓的protein 是 cleaved caspase 3 : : 使用的抗體是 cell signaling 編號9661 的抗體 : : 今天我做實驗 : : 壓出來一整片都是黑的 : : 結果關燈發現整片menbrane都發亮 : : 我很確定我二抗沒有給錯啦@@ 且也有很努力的wash乾淨 : : 因為抗體是跟別人要的 : : 且我同學他也沒有做過這個protein @@ : : 有人跟我說如果是 Polyclonal antibodies 的 : : 他的專一性也會比較差 : : 會是這個原因嗎? : : 該怎麼改善呢? : : 希望有做過的版友可以提供我一點意見 : : 好讓我下次再試的時候知道該怎麼改進@@ 小弟的個人經驗是這種情況通常是"抗體"本身的問題然後如果要換的話他們會要你填一個complain form 內容不外乎 1.換成BSA blocking 2.增加TBS的Tween-20 的量(譬如從0.1%改成0.5%) 3.稀釋一抗及二抗的濃度 4.增加wash的時間及次數 5.換成比較不敏感的ECL 但是依照往常的經驗作完這些ｔｒｏｕｂｌｅ　ｓｈｏｏｔｉｎｇ之後　　會 feel more troubled 因為都沒有用當你把trouble shooting的slide給他後他們只好賠給你一隻不同Lot 或是不同epitope的抗體以上是換了好多隻抗體的感想祝你可以借到另一隻好的Caspase3 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^(根本的解決之道) : : 感恩感謝～！！！！！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.34 ※ 編輯: Mrbrowncafe 來自: 123.192.22.34 (07/01 18:31)