Re: [求救] E.coli表現請教

看板Biotech (生命科學)作者SPK (雲淡風輕)時間16年前 (2009/07/02 01:19)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《FUSION87 (一起企都都轟阿)》之銘言： : 大家好 : 小弟的實驗有點複雜.. : 大致上是將兩種plasmid共同transform到BL21(DE3)中 : 他們分別是pET42-based及pACYC184-based的plasmid : 其中pET42搭載一個目標蛋白 : 而pACYC搭載三個目標蛋白總共會表現4種target proteins : 我的目標是pACYC上的三個蛋白在表現後會對pET42所表現的蛋白進行後修飾... : 我要純化被修飾的蛋白... : 由於這個pACYC184-based的plasmid是已經有人發表過的東西 : 所以應該是可以work的，同時我也利用別的plasmid去co-transform過確認他OK的 : 而我的pET42的蛋白若是單獨表現也都可以純化到大量的target protein : 只是當我在co-express的時候，pET42的表現量會大幅度的下降 : 下降到不像單一表現時那種很突出的band,就是雖然有但是並沒有特別多 : 目前已經測試過16、25、37度或是時間點上的差異測試 : 效果都不是很顯著，IPTG的量上還正在測... : 只是在想說在更改什麼條件下會讓蛋白的總產量增加?? : 因為似乎不管那種條件都會有一些蛋白跑到Inclusion body裡.. : (不過不知道有沒有可能是蛋白跑去把不溶的protein修飾了..) : 所以那就想說使總產量增加的方法也可以... 想先問一下，那另外三種蛋白的表現量狀況是怎樣？如果另外三種很強，那你的重點就不是在IPTG這些東西了吧，應該是加強pET42的表現，例如換一個promoter比較強的plasmid 如果連另外三個的表現量也不高，那考量一下換別隻表現蛋白的comptant cell，不一定用BL21可以用GOLD BL21或者像你現在正在做的，去改培養條件、加IPTG等來增加表現量。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 60.198.64.89