Re: [求救] 關於重組target protein
※ 引述《reiosea (reiosea)》之銘言：
: 不好意思我表達不好
: 我想做的是把這個蛋白質重組出來，然後用Phage display找出有鍵結能力的peptide
: 我想找出可以有潛力去抑制這個化學感受器功能的peptides。
: 所以我只需要他露在細胞膜外的結構，而不要求其功能。
: 但是我現在卡在似乎這蛋白為unsoluble protein.
: 我怕說在做重組時這個蛋白會很難分離純化。
: 那我想說是不是可以只把它soluble的部份做重組就好（當然這個部位必須是在細菌膜
: 外）。
: 我想問的是這樣的方法可行嗎？
: 再來是我該如何去找出這個蛋白質哪一段是可溶哪段是不可溶。
: 我去跑TMHMM發現這個蛋白質都是在膜外。
: 這意味著她其實為可溶性？
: 可以以此為依據嗎？
對不起小弟能力有限 只好幫分析一下原PO的問題 沒辦法建議 囧
已有
一段cDNA encoding 一段"疑似"是membrane protein
目標
想找出這一段蛋白質的soluble 的 binding domain 的 target
問題
1.確定soluble binding domain 是extracellular 還是intracellcular?
2.TMHMM只是預測 有確定的aa sequence(cDNA)嗎? 其他網站有可靠的structure嗎?
3.原PO似乎想切割soulble domain 來進行重組(+tag)以便以分子的方式來篩選標的物?
4.細胞原生可行嗎?overexpress這個protein 在細胞上 然後在用標的物去篩選? 不過比較麻煩
待補充.........
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