Re: [求救] 有關protein純化
※ 引述《a343408065 (寂寞東京鐵塔)》之銘言：
: 最近我在純化protein時一直有無法denature完全的問題
: 我們純化的protein是inclution body
: 我們目前是用6M urea去denature 破菌後的離心pellet
: denature 兩小時後再離心取上清液去通Nico column
: denature時也確實有混合均勻
: 但跑SDS-PAGE出來的結果
: 還是發現有很多protein殘留在不要的pelet裡
: 想請問真的是需要提高濃度才能完全純化出我們要的蛋白嗎
可以用8M urea或guanidium chloride試試看
不過不太懂的是,為何混合均勻還會有pellet?
記得以前做的時候,都是慢慢將pellet suspension慢慢滴入
6M urea中,攪拌到透明狀,應該不會有pellet才是,會不會urea體積
用的太少,最後蛋白質的濃度為多少呢?有的protein的最後濃度
為0.5 mg/mL是確定可以溶的。也許可以試著控制蛋白質溶在urea的量,
或許可以增加溶解度。
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