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[求救] 請問K562細胞和羊水幹細胞哪個大?!

看板Biotech (生命科學)作者 (阿啾)時間16年前 (2009/09/16 21:07), 編輯推噓2(2推 0噓 16→)
留言18則, 4人參與, 7年前最新討論串1/1
不好意思我想請問一下K562和羊水幹細胞哪個大呢?! 因為我最近在萃取PROTEIN 可是一直都做得不是很好, 到最後一步離心完整個是很清澈, 然後去測OD值的結果也超低的!! 所以我在想我是不是因為細胞太小雖然細胞數足夠(6*10^6) 但因為細胞小所以蛋白質少!! 以下是我的步驟!! 1.用 cold d-PBS wash 兩次4度C 1500rpm 5min 2配lysing buffer + protease inhibitor 3.cell pellet vortex 4.加50ul的 2. 5.劇烈vortex 之後冰上作用十分鐘 6.離心10000 rpm 2min 4度C 7.取上清液到新epp 8.存20度C 麻煩幫我鑑定一下我到底哪裡出問題!! 拜託大家了>"<!! 因為我有時間上的限制!! 謝謝.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.167.138.238
推
09/16 21:22, , 1F
細胞過多，導致lysis br.不夠力
09/16 21:22, 1F
→
09/16 22:08, , 2F
不好意思,請問所以是lysing buffer加不夠的關係嗎?!?!?!
09/16 22:08, 2F
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09/17 06:42, , 3F
6*10^6的細胞數加300~500ul的lysis br.應該沒問題
09/17 06:42, 3F
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09/17 06:48, , 4F
因為每種細胞的的細胞膜特性不同，我建議你可以6*10^6分成
09/17 06:48, 4F
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09/17 06:50, , 5F
六份，分別加入50,100,150,200,250,300ul的lysis br.看哪
09/17 06:50, 5F
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09/17 06:51, , 6F
一比例所得到的total protein量最多
09/17 06:51, 6F
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09/17 08:59, , 7F
還有不好意思我再請教一個問題..
09/17 08:59, 7F
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09/17 09:00, , 8F
lysis buffer可以用lysing buffer代替嗎?!我學長說可以..
09/17 09:00, 8F
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09/17 09:00, , 9F
可是我看成分差很多耶!!!!!!!!
09/17 09:00, 9F
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09/17 14:28, , 10F
我個人認為溶細胞取決於detegent種類（NP40, Triton or.）
09/17 14:28, 10F
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09/17 14:30, , 11F
pH值，高等低張溶液，其他就隨自己實驗調整，如proteinase
09/17 14:30, 11F
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09/17 14:31, , 12F
inhibitor，phosphatase inhibitor等，只要做的出來，就是
09/17 14:31, 12F
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09/17 14:31, , 13F
好br.
09/17 14:31, 13F
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09/17 15:42, , 14F
好的..謝謝你我明天再取多一點來測試看看各不同量的lysin
09/17 15:42, 14F
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09/17 15:42, , 15F
g buffer!!今天就用昨天用的來測OD吧!!希望有用!
09/17 15:42, 15F
推
09/17 21:15, , 16F
lysis buf跟lysing buf有什麼不一樣嗎!?講法沒固定吧
09/17 21:15, 16F
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11/11 01:44, , 17F
inhibitor，p https://daxiv.com
11/11 01:44, 17F
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01/03 17:01, 7年前 , 18F
6*10^6的細胞數加 http://yofuk.com
01/03 17:01, 18F
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