[求救] 請教ㄧ些關於跑flow protocol 的問題~~

看板Biotech (生命科學)作者mzac1b (Goodday)時間16年前 (2009/11/27 05:50)推噓1(1推 0噓 7→)

留言8則, 3人參與討論串1/1

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我買了一些抗體如這支 Fluorescein isothiocyanate (FITC) anti-mouse/human CD44 (Pgp-1, Ly-24) http://www.ebioscience.com/ebioscience/specs/antibody_11/11-0441.htm 要分析一些貼附細胞, 其中 CD44+ 佔所有細胞的比率我去找了一篇文章想參考其ptrotocol Transplantation of adipose-derived stem cells overexpressing hHGF into cardiac tissue Biochemical and Biophysical Research Communications 379 (2009) 1084–1090 其大略protocol 如下: 1. 10^5 cells were resuspended in 200ul PBS containing 0.5% BSA (bovine serum albumin) 2. incubated 30 mins at 4度 with fluorescence-labelded antibodies against CD44 3. After washing with PBS with BSA 3 times, the cells were suspended in PBS and analyzed by flow cytometry 由於我之前沒做過flow 分析, 我這邊ㄧ時也找不到人問心中有許多疑問想請問眾先進們~~ 1. 我參考那篇文章的protocol, ok 嗎? 2. 為什麼它的PBS要加5%BSA? 不加的話會有影響嗎? 3. 有的protocol 還會在PBS 加 Ca+2 or Mg+2 為什麼? 有需要嗎? 4. 為什麼有的protocol 說要用staining buffer? 如下這個protocol http://www.imgenex.com/getfile.php?manual_id=42 staining buffer 有差嗎? 有需要嗎? 5. 如果flow 讀得到螢光值 (如FITC 的螢光) 螢光顯微鏡看得到嗎? 我是說會不會 flow 讀出差異, 但在一般螢光顯微鏡弱到看不到? 感謝指教~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.58