Re: [求救] 酵母菌 transformation
※ 引述《wansue (永遠的彼得潘)》之銘言：
※ 引述《wansue (永遠的彼得潘)》之銘言：
: 最近在做酵母菌的轉型，所使用的buffer等材料都有滅過菌，
: 可是負對照一直有長菌(做了n次都是一樣的結果)，請問會是哪裡出了問題??
(長的是酵母菌)
: p.s使用invitrogen kit所示的方法步驟(lithum acetate)
1. 10ml YPD養 YEAST， 30度C 培養overnight
2. transfer to 50ml fresh YPD，30度C 培養4小時
3. 1500 rpm 離心5分鐘，再以40ml的1xTE 懸浮
4. 1500 rpm 離心5分鐘 ，以2ml 1xLiAc/0.5xTE 懸浮 置室溫10分鐘
5. 1ug plasmid DNA + 100ug denatured salmon sperm DNA + 100ul 步驟4的菌液
+ 700ul 的 1xLiAc/40%PEG-3350/1xTE 混合均勻後30度C培養30分鐘
6. 加88ul DMSO混勻 42度C 7分鐘
7. 離心10秒 移除上清液，以1ml 1xTE懸浮
8. 離心10秒 移除上清液，以100ul 1xTE懸浮後塗盤(YPD plate + 25ug Blasticidin)
9. 30度C培養兩天
p.s 質體為pYC6 菌種為INVSc1
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◆ From: 140.112.154.104
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