[求救] 請問將一段基因放入vector
各位好，我現在在化學實驗室工作，沒有分生專長的學長姐可以問
所以想請大家幫忙
我現在想在一個7k bp的E.coli vector中插入一段約60 bp的序列
大概是長這樣 ----T7 promotor-----intein---target protein-----
↑
插在這裡
intein是作為affinity column純化時使用，約50kD的protein
原本的MCS在intein的下游，但在插入target protein時已經用掉
那麼我該怎麼把60 bp插到promotor和intein的中間呢？
目前想到的大概是
用Site-directed mutagenesis在想插入60 bp的地方，
先插入兩種restriction site，約12或15 bp，再用ligase接上去。
不過不曉得Site-directed mutagenesis有沒有辦法直接插入60 bp呢？
另外，我們手頭上其實沒有這60 bp的DNA，應該要怎麼製作出來呢？
我猜大概可以先請別人合成60 bp的RNA，再用RT-PCR作出DNA...這樣做可行嗎？
原PO非專家，兩個簡單問題請教大家
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