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[求救] GFP fusion protein問題

看板Biotech (生命科學)作者 (..)時間16年前 (2010/04/16 11:48), 編輯推噓6(6推 0噓 4→)
留言10則, 6人參與, 最新討論串1/1
建構基因在GFP載體上 序列長度大約為2K bp 送質體到細胞中表現 並以抽完細胞蛋白 跑完 Western-blot 一抗以 Anti-GFP (mouse) 二抗以 Anti-mouse 結果只有GFP的蛋白質表現... 請問各位大大可能實驗上出了什麼問題 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.117.91.9
推
04/16 11:54, , 1F
沒有in frame?
04/16 11:54, 1F
→
04/16 17:03, , 2F
挑了很多個clone,因為序列很長 所以沒先定序就先送細胞
04/16 17:03, 2F
推
04/16 22:49, , 3F
沒定序？又只有gfp表現？肯定沒有接進去
04/16 22:49, 3F
→
04/17 00:43, , 4F
有用設計的primer去夾 請問這樣還是會有沒接好的可能嗎
04/17 00:43, 4F
推
04/17 01:25, , 5F
如果Primer沒設計錯,有in frame,那可能是PCR產生stop codon
04/17 01:25, 5F
→
04/17 01:27, , 6F
先定序吧~~(請教一下,在台灣定序跟Western那個比較便宜啊?)
04/17 01:27, 6F
推
04/17 04:06, , 7F
GFP後面有沒有stopcodon?
04/17 04:06, 7F
推
04/17 04:11, , 8F
現在送公司定序一支好像200-250NT 要怎樣比western的價錢?y
04/17 04:11, 8F
推
04/17 22:24, , 9F
定序應該比Western便宜吧～～重點是省時阿!
04/17 22:24, 9F
→
04/18 00:20, , 10F
謝謝大家的回答~我會先定序 再看看問題可能在哪裡
04/18 00:20, 10F
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