Re: [求救] surface biotinylation 的 Quenching ꠠ…
※ 引述《iamrim (笨小孩~)》之銘言：
: 用biotin去label surface protein (ex:E-cadherin)
: 證明E-cadherin internalization
: 在Quenching buffer(reduced glutathione,0.83M NaOH..)treatment
: 去除在surface上bibotin
: 但treat Quenching buffer之後,細胞就開始有點飄飄
: 有點黏稠的透明液(該不會是細胞都破了.DNA流出來?!)
: 加了PBS之後細胞全都飄了...(Quenching buffer還蠻鹼的)~
: 不加PBS直接lysis.protein都不知道有沒有收好>"<
: 不知道該怎麼辦才好....
: 希望有經驗的可以指導...謝謝
做biotinylation assay使用的6-well plate我會先coating 0.2mg/ml的PDL
細胞比較不會有飄散的問題
不然收lysate前有好多要wash的步驟 細胞真的很容易飄走
建議你可以試試看 :)
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