[求救] 上confocal的樣品處理
這幾次我在製備上confocal的樣品時 遇到一些問題 想請問一下有製備過
confocal樣品的各位
我的研究系統是將細胞培養在膠體內 然後利用FDA/PI去進行 活/死細胞的染色
我的步驟 是將膠體以PBS清洗數次後 -->染色-->PBS wash-->mounting solution
-->封片-->先上螢光顯微鏡觀察
到此為止觀察到的影像都ok(就是在gel內的細胞是一點一點綠色的)
隨後把樣品冰在-20度 -->上confocal前再以螢光顯微鏡觀察的時候 整個影像
變成綠色看不出 一點一點的細胞影像
後來嘗試把樣品冰在4度C 隨著時間變長 樣品的影像也逐漸變成整塊是綠色的
現在的困難點就是 confocal的預約時間不定 我無法要在上機前才製備樣品
不知道是否我的整個實驗過程是否有問題
查了一些文獻或者爬文 大家似乎都會先行將細胞固定 請問這個步驟是必須的嗎
用意為啥?冰在-20度C 都說樣品可以保存一個月但是我的樣品不到幾天原有的
影像變成整個綠的
補充一下 我的mounting solution是用90% glycerol以及0.1%的PPD所配成的
pH在8.5左右
先謝過看此文並回文的各位~~
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