[求救] Western blotting的band呈現啞鈴形....

看板Biotech (生命科學)作者 (修修)時間16年前 (2010/05/16 16:54), 編輯推噓6(6011)
留言17則, 7人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 想問一下 為什麼我用western壓片出來的band都呈現啞鈴的形狀呢?? 就是兩邊特別多~中間少~導致很像啞鈴的形狀 可否請問一下有誰知道~哪裡出了問題? 知道的說一下了~小弟感激不盡~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 125.231.209.65

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有人跟我說~是load蛋白的問題~不知道是不是這樣?
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還是有其他原因?
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invitrogen protocol:Dumbbell shaped bands after
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electrophoresis
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Loading a large volume of sample causes
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incomplete stacking of the entire sample.
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This effect is more intensified for larger protei
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上膠用更低的電壓慢慢跑,讓蛋白集得更好,大約50~60V試試吧!
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注意一下~你的抗體是不是 reuse 太多次了~
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補一點新的抗體進去或許會好一點~
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不太懂REUSE跟啞鈴型之間有啥關連...
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3樓是正解 我只有在做180kd的大蛋白才會發生!
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可是lysate濃度不高 load太少又很難看見... 真是兩難
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stacking久一點吧
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3F正解,啞鈴形跟跑膠比較有關,跟Ab reuse不太有關係
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如果非得load這麼濃/多的protein,那就再跑慢一點,會改善
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商人:濃度不高是唄~(拿出spin型濃縮管
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文章代碼(AID): #1BxxAtMO (Biotech)
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