[求救] 請問his tag的純化方法
實驗室第一次要做enzyme assay
我們手上拿的載體是pET-32系列 又有在改過
之前再做western blot時使用的抗體是有專一性很高的 S-protein kit
有抓到 有顯示出band
之後因為要做純化 為了省錢就選用his tag
以plasmid map來看 我們的目標蛋白是接在s protein後面 但是前面不遠處(約差200bp)
就是his tag的序列了 應該也是抓得到目標蛋白
但是現在通column的結果 量很少 跑膠有band 但有其他的雜band(不是單一band)
想說提高imidazole的濃度 卻又沒有band了
想請問有經驗的朋友 如果遇到這種情形還有哪些方法我可以去嚐試
不希望非得要換S˙tag (太貴了...)
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