Re: [求救] 長片段ligation>"<
重新回一篇想說這樣比較好看....如果不行請版主告訴我我會刪掉這篇在原文底下
重新po一次!!只是想報告我最後成功的條件^^"
insert4.7k, vector9.2k
Insert先PCR後送入invitrogen的ZeroBlunt vector，再用酵素切出來，gel elute。
Vector則以酵素切開gel elute。
這次我用Roche的一組ligation kit，本身附有自己的ciap酵素。按照說明書去做ciap
後接ligation, 比例I:V=5:1，transform(加完DNA後冰上20min,42度2min,冰上2min,
37度1hr)
隔天收盤，大概長了100顆左右。因為這組很貴,
加上我有另外做一組T4 ligase，已經包含vector only的control所以roche這組就沒有
做control囉~~T4 ligase那組的control為0，實驗組大概長了20幾顆。
roche挑八顆、T4 ligase挑16顆(16度C與4度C分別挑8顆)，用當初接進去的酵素切，結果
roche 8中7，T4..有切出insert大小片段但是vector消失Orz...
之後拿roche那七顆check正反，4顆正接!!有一顆多了一條實際不應該出現的band所以先
不管它= ="
結論:有的時候, 還是要砸點$$(?)
對了，T4 ligase那組我讓他ligation兩天@@"但還是出現那奇怪的結果..
以上就是我最後成功的過程囉~~希望能對同樣在長片段ligation掙扎的人有一點點參考
作用^^"
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[成就:發現北裂境] 擊殺下列其中一隻稀有且不好找到的北裂境生物。
ˇ羅奎納哈克 ˇ克洛許王 ˇ維拉茍莎 ˇ希爾達娜．亡據 ˇ德碁
ˇ大族長裘弗斯 ˇ吐克瑪斯 ˇ葛洛克拉 ˇ瘋狂的因度雷生還者者 ˇ冰角
ˇ祖爾德拉克哨兵 -台灣玩家 ˇ沸騰憎恨 ˇ『嗜血者』佩洛巴斯 ˇ老晶樹
ˇ血色大領主黛昂 ˇ恐懼紡織者 ˇ格里根 ˇ『雕骨者』塞瑞安 ˇ乒乒王
ˇ古老的普崔達斯 ˇ方寶．機風 ˇ奧托納 ˇ『戰爭侍女』崴格迪斯
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